A coleta deve acontecer, preferencialmente, por punção do calcanhar com lanceta adequada. No calcanhar, além de ser menos dolorido para o bebe é a técnica preconizada para melhor qualidade da amostra de sangue. O sangue venoso pode ser colhido, caso o bebê já tenha uma veia já puncionada.
O nome “Teste do Pezinho” se popularizou no Brasil por causa desta coleta no calcanhar.