Citometria

A citometria de fluxo é uma tecnologia que permite a análise simultânea de várias características estruturais e funcionais de células ou partículas biológicas suspensas em meio líquido em um sistema de fluxo contínuo. Através da dispersão da luz gerada pela interceptação da célula/partícula por um ou mais feixes de lasers, é possível captar informações como tamanho relativo, complexidade interna/granulosidade e emissão de fluorescências, permitindo a avaliação individual de milhares de células/partículas em um curto período de tempo. A Plataforma de Citometria de Fluxo oferece infraestrutura em equipamentos e suporte técnico-científico no desenho experimental, desenho e otimização de painéis, preparo de amostras, treinamento operacional dos instrumentos e na aquisição e análise de dados na área de citometria de fluxo.

Responsável pela plataforma:

Karina Lani Silva (Lattes)
Tecnologista
Email: karinalani@inca.gov.br
Telefone: +55 21 32076531

Lista de equipamentos:

• BD FACSCalibur™ - citômetro de fluxo equipado com os lasers azul (488nm) e vermelho (633nm). Através do laser azul, somos capazes de analisar os parâmetros físicos tamanho (FSC) e granularidade / complexidade interna (SSC), além das fluorescências nos canais FL1 (530/30), FL2 (585/42) e FL3 (670LP). O laser vermelho excita fluorocromos capazes de serem detectados pelo canal FL4 (661/16). É um equipamento analógico e os dados são coletados através do programa BD CellQuest Pro versão 5.1.1. Apenas tubos de poliestireno transparente de fundo redondo (12x75mm) são aceitos para aquisição das amostras. Capaz de adquirir até 2.000 eventos/segundo. Grava no máximo de 1 milhão de eventos por amostra. É o único equipamento da plataforma de citometria em que é permitido o uso de iodeto de propídio como marcador de DNA para ensaios de análise de ciclo celular e viabilidade.
• BD AccuriTM C6 – é um citômetro analítico, digital, voltado apenas para pesquisas científicas. Possui os lasers azul (488nm) e vermelho (640nm) sendo capaz de adquirir até 6 parâmetros simultaneamente: FSC, SSC e quatro fluorescências distintas através dos filtros FL1 (530/30), FL2 (585/40), FL3 (670LP) e FL4 (675/25). É um aparelho de fácil utilização, pré-otimizado, sem necessidade de ajustes de voltagem dos detectores e software intuitivo. É o único citômetro da plataforma capaz de fazer quantificação do número de células/µL ou do volume adquirido. A velocidade de aquisição e o diâmetro do core podem ser customizados. Capacidade analítica de até 10.000 eventos/segundo. Os dados são coletados através do programa BD Accuri C6 (máximo de 1 milhão de eventos por amostra). O aparelho comporta tubos de fundo redondo (12x75mm), microtubos e placas de, 24, 48 e 96 poços para aquisição das amostras.
• BD FACSCantoTM II – equipado com três lasers de excitação: azul (488nm), vermelho (633nm) e violeta (405nm). É um citômetro analítico, com tecnologia digital, e possui capacidade de detecção de até 10 parâmetros simultaneamente, incluindo os parâmetros físicos FSC e SSC e 8 canais para detecção de fluorescência, na seguinte configuração: laser azul - canais FITC (530/30), PE (585/42), PerCP (670 LP) e PE-Cy7 (780/60); laser vermelho - canais APC (620/20) e APC-Cy7 (780/60); laser violeta - canais Pacific Blue (450/50) e Amcyan (510/50). O FACSCanto possui maior sensibilidade e melhor resolução quando comparado ao FACSCalibur. Capaz de adquirir até 10.000 eventos/ segundo. O software de aquisição de dados é o FACSDiva 6.1, e possui capacidade de armazenamento de até 10 milhões de eventos por amostra. Apenas tubos de poliestireno transparente de fundo redondo (12x75mm), são aceitos para aquisição das amostras.
• BD FACSLyricTM – é um equipamento de alta-performance e sensibilidade. Sua tecnologia permite padronização com outros equipamentos FACSLyric, tornando-o uma ferramenta excelente para estudos multicêntricos em citometria de fluxo. Possui maior sensibilidade e resolução quando comparados aos demais citômetros da plataforma. É equipado com 3 lasers: azul (488nm), vermelho (640 nm) e violeta (405nm), sendo capaz de detectar até 12 fluorescências distintas, além dos parâmetros FSC e SSC. Os canais de fluorescência estão divididos na seguinte configuração: laser azul – canais FITC (527/32), PE (586/32), PerCP-Cy5.5 (700/54), PE-Cy7 (783/56); laser vermelho – canais APC (660/10), BD Horizon APC-R700 (720/30), APC-Cy7 (783/56); laser violeta – canais BD Horizon V450 (448/45), BD Horizon V500-C (528/45), BD Horizon BV605 (606/36), BD Horizon BV711 (712/50) e BD Horizon BV 786 (755 LP). Capacidade de aquisição de até 35.000 eventos/segundo e capacidade ilimitada de arquivamento. Possui dois softwares para aquisição dos dados: o BD FACSuite v1.4.1 para aquisição de dados em pesquisa científica e o BD FACSClinical v1.4.1 para utilização em testes de diagnóstico. Apenas tubos de poliestireno transparente de fundo redondo (12x75mm), são aceitos para aquisição das amostras.
• MoFlo Astrios EQs Cell Sorter – é um separador de células, jet-in-air, de alta velocidade, equipado com 3 lasers: violeta (405nm), azul (488nm) e vermelho (640nm), sendo capaz de detectar os parâmetros físicos FSC (no laser azul) e SSC (nos lasers azul e vermelho), além de 11 fluorescências na configuração a seguir: laser violeta filtros 448/59 (ex: BV421, Pacific Blue) e 546/20 (ex: BV510, Pacific Orange); laser azul filtros 513/26 (ex: FITC, GFP), 576/21 (ex: PE, dsRed), 620/29 (ex: PE-Texas-Red), 664/22 (ex: PE-Cy5), 710/45 (ex: PE-Cy5.5), 795/70 (ex: PE-Cy7);  e laser vermelho filtros 671/30 (ex: APC, AF647), 722/44 (ex: AF700, APC-Alexa700), 795/70 (ex: APC-Cy7). Possui nozzles de 70 µm e 100 µm. As amostras podem ser adquiridas em tubos de citometria ou tubos cônicos de 15mL e 50mL. Possui várias formas de coleta das amostras: até 2 vias (tubos cônicos de 15mL ou 50mL), até 6 vias (tubos de citometria e eppendorfs) e modo single cell em placas de 6, 24, 96, 384 e 1536 poços. O software de aquisição é o Summit 6.3.1.

Utilização:

O uso dos aparelhos é permitido a estudantes, pesquisadores e funcionários do INCA treinados ou acompanhados por pessoas treinadas, mediante agendamento prévio. Para usuários externos, deverá ser solicitada autorização junto ao responsável pela plataforma. Objetivando a prestação de contas de dados gerados através da utilização da plataforma e a captação de recursos necessários para manutenção e/ou aquisição de novos equipamentos, os artigos científicos publicados ou qualquer outra produção intelectual deverão referenciar o equipamento na sessão "Materiais e Métodos", bem como referenciar a Plataforma de Citometria de Fluxo do INCA na sessão "Agradecimentos", pelo uso dos equipamentos e suporte técnico.

Para maiores informações e agendamentos entre no site:
https://citometriacpqinca.wixsite.com/website

Localização:
Instituto Nacional de Câncer
Coordenação de Pesquisa
Rua André Cavalcanti, 37, 5º andar
Centro, Rio de Janeiro
CEP: 20231-050